Lupita Amondi Nyong’o blev født i Mexico, men voksede op i Kenya. Hun tog sin uddannelse i USA, hvor hun studerede på Yale University School of Drama.

Hendes debut som skuespiller var i 2008, da hun medvirkede i kortfilmen 'East River'

I 2013 fik hun sin første rolle i en spillefilm i det historiske-drama 12 Years a Slave, som er instrueret af Steve McQueen. Her havde hun birollen som slaven Patsey. Rollen blev Nyong’os internationale gennembrud, og indbragte hende en oscar for bedste kvindelige birolle.

Stjernen har også lagt stemme til karakterer i The Jungle Book og Star Wars: The Force Awakens.